有沒有ELISA結果判讀的常見問題解答

　　ELISA結果判讀常見問題解答，本生BUNSEN技術老師驗后的數據困惑總結：

　　一、基礎判定類問題

　　陽性/陰性/不確定結果分別代表什么??

　　陽性：樣本OD值高于試劑盒設定的Cut-off臨界值，提示檢出目標物;陰性：OD值低于臨界值，未檢出目標物;不確定：OD值落在臨界值附近的灰區，無法直接判定，需重復檢測或用其他方法驗證。

　　樣本OD值低于空白值，是實驗失敗了嗎??

　　不一定。少量樣本出現該情況多是操作誤差，增加重復孔即可;大量樣本出現則大概率是基質效應，可通過稀釋樣本、用含動物血清的PBS配制校正曲線來修正。

　　二、標準曲線相關問題

　　標準曲線R2達不到0.99，還能用嗎??

　　不建議直接使用。R2低于0.98時，所有樣本的濃度計算誤差會明顯增大，優先排查標準品稀釋梯度是否出錯、移液器是否校準、復孔是否有跳點，修正后重新擬合曲線。

　　高濃度標準品OD值反而比低濃度低，是什么原因??

　　這是典型的?鉤狀效應，高濃度抗原占據所有抗體結合位點，無法形成有效夾心復合物，信號反而下降，將高濃度樣本梯度稀釋后重新檢測即可恢復正常。

　　三、異常結果類問題

　　明明是陰性樣本，卻測出陽性結果(假陽性)，常見原因有哪些??

　　多由交叉反應、樣本溶血/脂血、洗滌不凈、封閉不充分導致，可通過選擇高特異性抗體、離心去除樣本雜質、增加洗滌次數來降低假陽性概率。

　　預期陽性的樣本測出陰性(假陰性)，該怎么排查??

　　優先檢查樣本中目標物濃度是否低于檢測限、孵育時間/溫度是否不達標、樣本是否反復凍融破壞了抗原結構，可嘗試濃縮樣本、延長孵育時間重新檢測。

　　整板都出現高背景、全板發黃，是什么問題??

　　大概率是洗板不充分、底物孵育時間過長、封閉步驟失效，可調整為每步洗滌5次、底物避光孵育10-15分鐘后及時終止，更換更合適的封閉劑重新實驗。

　　四、實操注意事項

　　不同試劑盒的Cut-off值、參考范圍存在差異，判讀時必須以對應試劑盒的說明書為準。

　　ELISA檢測僅作為初篩手段，陽性結果需通過Western Blot、hesuan 檢測等方法做最終確認。

　　注：以上科研產品資料供參考!

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